日本臨床微生物学会雑誌：書誌情報

日本臨床微生物学会雑誌

書誌情報

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Article in Japanese

論文名	全自動遺伝子解析装置GENECUBEを利用したMycoplasma pneumoniaeのマクロライド耐性遺伝子変異検出法の構築および評価
論文言語	J
著者名	川嶋　洋介1）, 上倉　佳子2）, 山下　計太3）, 野竹　重幸3）, 中村　浩司3）, 木全　伸介2）, 曽家　義博1）, 鈴木　広道4,5）
所属	1）東洋紡株式会社診断システム事業部 2）東洋紡株式会社敦賀バイオ研究所 3）筑波メディカルセンター病院臨床検査科 4）筑波メディカルセンター病院臨床検査医学科 5）筑波メディカルセンター病院感染症内科
発行	臨床微生物：28（2），98─105，2018
受付	平成29年7月18日
受理	平成29年10月19日
要旨	近年マクロライド耐性を有するM. pneumoniaeが増加している。マクロライド耐性化には23S rRNAの構造変化に関与する遺伝子変異が関わる。M. pneumoniaeのマクロライド耐性を確認する方法として，ダイレクトシークエンスや融解曲線解析による23S rRNA遺伝子変異の検出が用いられる。我々は全自動遺伝子解析装置GENECUBEを使用し，PCR-Quenching Probe（QProbe）法によりM. pneumoniaeの23S rRNA遺伝子を検出し，主要なマクロライド耐性遺伝子変異である2063位および2064位の置換変異の有無を確認する検出系を構築した。本検出系を用いた融解曲線解析によって，23S rRNA遺伝子の2063位または2064位の変異の有無は明確に区別された。最小検出感度は25コピーであり，M. pneumoniae以外のMycoplasma属細菌5種およびMycoplasma属以外の細菌15種との交差反応を示さなかった。この検出系を用いて832例の咽頭後壁擦過物を測定したところ，M. pneumoniae陽性は261例，陰性は571例であった。M. pneumoniae陽性例のうち検体抽出液の保管が可能であった217例を対象にダイレクトシークエンスによる23S rRNA遺伝子の変異解析を行った。シークエンス解析が可能であった173例のうち野生型であると確認された82例について，本検出系で得られた融解曲線の検出ピークの温度は57.5±1.16℃（平均±2×標準偏差）であり，変異型であった91例について，本検出系で得られた融解曲線の検出ピークの温度は47.8±1.85℃（平均±2×標準偏差）であった。本検出系の測定結果から推測された遺伝子型はダイレクトシークエンスによる23S rRNA遺伝子の解析結果と100％一致した。
Keywords	Mycoplasma pneumoniae, PCR, macrolide resistance, GENECUBE, QProbe